截至2021年，報道的乳鐵蛋白的檢測方法包括酶聯(lián)免疫法、高效毛細管電泳法、生物傳感測定法、高效液相色譜法、高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用法等 。
酶聯(lián)免疫法
酶聯(lián)免疫法是一種基于抗原抗體特異性反應(yīng)的檢測方法，具有反應(yīng)靈敏、特異性強等優(yōu)點。在微孔板中包被抗乳鐵蛋白抗體（一抗），加入目標(biāo)物乳鐵蛋白后，乳鐵蛋白與一抗結(jié)合，再加入乳鐵蛋白抗體（二抗）與之形成夾心結(jié)構(gòu)，最后加入顯色劑，利用酶標(biāo)儀測定特定波長的吸光度值，其吸光度值與乳鐵蛋白含量成正比，可繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線達到定量檢測樣品中乳鐵蛋白濃度的目的。酶聯(lián)免疫法雖然靈敏度高，但通常需要進行多重的孵化、洗滌和清洗，操作較為繁瑣，且所用抗體及抗抗體制備不易，價格昂貴，不適合用于大批量的樣品分析。
高效毛細管電泳法
樣品分子擴散系數(shù)越小或分子量越大，毛細管柱的分離柱效越高。高效毛細管電泳法大多數(shù)使用石英材質(zhì)的毛細管為分離通道，用高壓直流電場作為驅(qū)動達到液相分離的目的，具有操作簡單、靈敏度較高等優(yōu)點，但需要解決毛細管壁對目標(biāo)物質(zhì)乳鐵蛋白的吸附導(dǎo)致的重復(fù)性差的問題，且檢測結(jié)果受樣品復(fù)雜基質(zhì)的影響較大。
表面等離子共振技術(shù)
以臨界角入射到不同折射率的兩種金屬介質(zhì)界面的入射光線可以引起金屬產(chǎn)生自由的電子共振，電子吸收光能量使反射光大幅減弱，能夠使反射光在一定角度內(nèi)完全消失的入射角稱為SPR角。SPR角隨介質(zhì)表面折射率變化而變化，而折射率的變化又與介質(zhì)表面結(jié)合的分子質(zhì)量成正比，因此可以通過對生物反應(yīng)過程中SPR角的動態(tài)變化獲取生物分子之間相互作用的特異信號達到檢測的目的?；诒砻娴入x子體共振技術(shù)的生物傳感免疫測定法，無需進行標(biāo)記便可實時，自動檢測低含量乳鐵蛋白，但實驗溫度及樣品組成影響測定結(jié)果，儀器設(shè)備造價也較為昂貴。
高效液相色譜法
高效液相色譜法（HPLC）是利用不同的色譜柱對不同組分因分配系數(shù)及吸附力大小的不同而被分離，并被檢測器識別的技術(shù)，其中由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系的反相高效色譜是HPLC中應(yīng)用最為廣泛的一種液相色譜法，優(yōu)點是反應(yīng)靈敏、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好，但缺點是對樣品的純度要求較高，往往需要經(jīng)過復(fù)雜的前處理過程才能進樣。
高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用法
質(zhì)譜儀通過測量特定離子的質(zhì)核比來對待測物進行準(zhǔn)確定性，通常與高效液相色譜或氣相色譜儀等聯(lián)用來達到精確定量的目的。由于蛋白質(zhì)分子質(zhì)量太大，在對蛋白質(zhì)的分析中，通常將其利用各種手段如胰蛋白酶水解為肽段的混合物，再通過對其中的特異性肽段的測定來檢測該蛋白。有報道稱研究人員將蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)、同位素標(biāo)記技術(shù)與高效液相色譜-質(zhì)譜法相結(jié)合來檢測乳制品中的乳鐵蛋白。液相質(zhì)譜法結(jié)果靈敏可靠、重復(fù)性高、回收率高，但是需要將蛋白質(zhì)大分子打碎成氨基酸小分子，通過特定的氨基酸片段來進行定性和定量，此時蛋白質(zhì)已經(jīng)變形，不利于待測樣品中對于乳鐵蛋白是否有活性的判斷，且設(shè)備昂貴，對操作人員的專業(yè)性要求更高。
文章來源于百度百科：https://baike.baidu.com/item/%E4%B9%B3%E9%93%81%E8%9B%8B%E7%99%BD/3407131?fr=aladdin